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核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle)，主要由RNA和蛋白质构成，其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链，所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构，主要由蛋白质(40%)和RNA(60%)构成.核糖体按沉降系数分为两类，一类(70S)存在于细菌等原核生物中，另一类(80S)存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。
本产品提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取总核糖体。提取过程简单方便。
本试剂盒不能用于冷冻样品的核糖体提取。
本试剂盒需要使用超速离心。如果没有超速离心的条件，可以选择其它货号的试剂盒，采用低速离心提取核糖体(相关产品：HR9071)。使用超速离心的试剂盒的核糖体纯度高于低速离心的试剂盒，低速离心的试剂盒产品提取时间较长，需要过夜处理。请根据试剂需要选择。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
● 离心机● 振荡器● 匀浆机/Dounce匀浆器● 涡旋混匀器● PBS ● 蛋白定量试剂盒

组份	50T	100T
组份A：酵母核糖体提取液A	20mL	40mL
组份B：酵母核糖体提取液B	25mL	50mL
组份C：酵母核糖体提取液C	20mL	40mL
组份D：酵母洗涤液D	50mL	100mL
组份E：核糖体保存液E	20mL	40mL

2～8℃保存，有效期1年。
注：
● 酵母核糖体提取液B、酵母洗涤液D长期不用时-20℃保存，避免反复冻融。


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 如果是做核酸类下游应用，实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。
● 下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。
● 细胞最好采用新鲜收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
● 最好使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是核糖体回收率可能会下降。

• 酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
  
• 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  注：
  ● 在1000×g离心5分钟。
  
• 每100μL体积或100mg湿重酵母沉淀物中加入400μL酵母核糖体提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
  注：
  ● 酵母数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
  
• 在1000×g条件下离心5～10分钟，收集酵母沉淀。
  
• 用300μL酵母洗涤液D重悬细胞，静置10分钟，离心收集酵母。
  
• 酵母沉淀物中加入500μL酵母核糖体提取液B，充分混匀。
  注：
  ● 根据酵母细胞量调整提取液用量，一般加菌体体积的2～5倍均可。
  ● 按酵母菌体体积每100μL或100mg湿重菌体加入250～500μL提取液。
  
• 在37℃或室温条件下轻微振荡60～90分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔10分钟用移液器吹打混匀。
  ● 不同酵母样本需要的时间差异较大，根据下游细胞裂解的难易程度调整，如果下游试剂C处理后沉淀没有明显减少，需要延长此步骤处理时间。可以延长至2小时。
  
• 在2000×g条件下离心5～10分钟，弃上清，收集沉淀。
  
• 沉淀用300μL酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。
  
• 在沉淀中加入400μL酵母核糖体提取液C，充分混匀，用Dounce匀浆器匀浆20～30下。
  注：
  ● 标准Dounce匀浆器用紧杵5～8次，松杵匀浆15～20次。
  ● 匀浆杵一个上下来回为一次。
  ● 普通玻璃匀浆器匀浆一般也不超过30次，匀浆次数并非越多越好。
  ● 如果无匀浆器，可在加入试剂C后在振荡器上振荡10～30分钟。用振荡器/摇床较低转速，保持提取液有轻微晃动即可。没有振荡器的话，在4℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  ● 试剂C处理后沉淀应减少，否则振荡延长处理时间。
  
• 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃，20000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃，100000×g～120000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心时间延长到2～24小时。可以提高核糖体回收率。
  ● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离管离心。
  ● 没有该离心条件的话，可以选择其它货号的低速离心的试剂盒(相关产品：HR9071)。
  
• 弃上清，沉淀即为核糖体。
  
• 沉淀用核糖体保存液或其他相应的缓冲液重悬。即得到酵母核糖体样品。
  注：
  ● 也可不用提供的核糖体保存液重悬，根据实验需要选择合适的缓冲液重悬核糖体或直接用于下游实验。
  
• 置冰箱备用或直接用于下游实验。

相关搜索：酵母核糖体提取试剂盒，Yeast ribosome Extraction Kit